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兔白介素2(IL-2)ELISA试剂盒的洗板方法
发布时间:2019-06-13   点击次数:36次
   兔白介素2(IL-2)ELISA试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定,易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检。
  兔白介素2(IL-2)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被样本抗体的包被微孔中,依次加入标本•●、标准品•●、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  兔白介素2(IL-2)ELISA试剂盒洗板方法
  1•●、手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
  2•●、自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
  操作步骤
  1•●、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2•●、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3•●、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
  4•●、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5•●、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6•●、每孔加入底物A•●、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7•●、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  兔白介素2(IL-2)ELISA试剂盒的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔显色的情况适当缩短或延长反应时间,及时判断。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。
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